流通池法（流池法）一直被認(rèn)為是研究微粒和脂質(zhì)體溶出行為的方法，有不少文獻(xiàn)對此進(jìn)行了深入的研究和探討。所以，今天跟大家分享Wenmin Yuan等人利用流通池法，研究復(fù)合阿霉素（DOX）脂質(zhì)體制劑溶出的案例。

本研究指出，流通池法是一種可靠的復(fù)雜脂質(zhì)體產(chǎn)品溶出分析方法，該方法受到操作誤差的影響較小，并且可以在不同脂質(zhì)體制造商之間輕松地進(jìn)行方法轉(zhuǎn)移。

1. 材料和方法

透析管的分子量截止值（MWCO）：300 kDa。

DOX脂質(zhì)體樣品量：將0.4ml的DOX脂質(zhì)體制劑（2mg/ml）與1.2ml溶出介質(zhì)混合。

溶出介質(zhì)：100mM NH4HCO3，75mM 2-(N-嗎啉)乙磺酸（MES）和5% w/v 羥丙基環(huán)糊精（HP-CD），5% w/v蔗糖，0.02% w/v NaN3（pH6）。

溶出介質(zhì)體積：78.4ml。

溫度：37℃、45℃和 55℃。

流速：16 mL/min。

模式：閉環(huán)。

紫外檢測波長：480 nm。

2. 結(jié)果

2.1 溫度對溶出度的影響

如下圖所示，在55℃、45℃和37℃下，7小時內(nèi)DOX的累積溶出率分別為91.0% ±1.6%、42.4% ±0.6%和4.5% ±0.1%。

隨著溫度的升高，溶出量顯著增加。研究選擇45°C作為后續(xù)測試溫度，是因為在此溫度條件下，樣品在24小時內(nèi)幾乎*溶出（95.3%±1.2%），但溶出速率不會太快，可以區(qū)分制劑之間的差異。

2.2 日常變異性

使用相同的樣品制劑在三個不同日期進(jìn)行溶出試驗，分析日常變異性。實驗結(jié)果表明該方法的日常變異是可控的。在溶出曲線上沒有觀察到顯著差異（在第1天和第2天，f2=73.4；在第1天和第3天，f2=63.4；在第2天和第3天，f2=81.0）。

2.3 脂質(zhì)體組成及制備方法對溶出的影響

將市售的Doxil®作為參比制劑。處方中使用HSPC替代POPC，樣品可在10小時內(nèi)迅速、*地溶出。脂質(zhì)體處方中其他成分與Doxil®相同，但制劑的物理化學(xué)性質(zhì)略有不同。

研究中制備的所有制劑的溶出率均低于市售Doxil®。在制備的脂質(zhì)體中，與低壓均質(zhì)（L-DOXp）相比，高壓均質(zhì)（H-DOX）制備的脂質(zhì)體具有更快的溶出率。由于H-DOX制劑的平均粒徑更小，粒徑分布更廣，這可能是DOX溶出速度加快的原因。

脂質(zhì)體擠出前制備多層脂質(zhì)體（MLV）的方法對DOX的溶出也有影響。在硫酸銨水溶液（L-DOXp）中注入脂質(zhì)溶液制備MLV時，DOX的溶出比在水溶液（L-DOXi）中高壓注射脂質(zhì)溶液制備MLV時慢。

3. 討論

本研究建立的流通池測定法的主要局限性在于：測試條件本身決定了脂質(zhì)體溶出結(jié)果。實驗溫度對DOX溶出率有顯著影響，終選定的流通池法參數(shù)與生理條件相差甚遠(yuǎn)。因此，該方法可主要用于區(qū)分阿霉素脂質(zhì)體制劑之間的相對差異，而不是定義體內(nèi)相關(guān)性。

流通池法分析條件的主要優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)是在12小時內(nèi)看到超過80%的藥物從Doxil®中溶出，以便能夠在24小時內(nèi)鑒別出具有更快或更慢溶出行為的脂質(zhì)體制劑。

研究還發(fā)現(xiàn)，成分相同但采用不同方法制備的制劑，具有稍微不同的物理化學(xué)性質(zhì)的制劑在體外可表現(xiàn)出非常不同的溶出。

4. 結(jié)論

本研究對流通池法的參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，以適用于不同工藝制備的阿霉素脂質(zhì)體脂質(zhì)體體外溶出測試。已建立的流通池法可用于區(qū)分普通脂質(zhì)體和新型阿霉素脂質(zhì)體之間的可能差異，為設(shè)計更好的制劑提供有用的反饋，并有望可以將這些制劑的體外溶出行為與體內(nèi)藥代動力學(xué)結(jié)果進(jìn)行聯(lián)系。

原文：Developmentof a Flow-Through USP-4 Apparatus Drug Release Assay to Evaluate Doxorubicin Liposomes, Wenmin Yuan等, The AAPS Journal.

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